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dnf枪剑士:蛋白純化實驗,怎樣選擇合適的配基和金屬離子?

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固定化金屬親和層析(IMAC)是蛋白純化的常用方法,特別適用于純化多組氨酸(His)標簽融合蛋白。金屬離子通過螯合劑(配體)固定到基質上,與多組氨酸標簽相互作用,有效的螯合樣品中的融合蛋白。氮川三乙酸(NTA)和亞氨基二乙酸(IDA)是商業化樹脂中經常使用的螯合配基。怎樣選擇合適的配基和金屬離子,應用于蛋白純化實驗呢?

 

首先,我們比較一下NTAIDA。NTA4價結構,IDA3價結構,NTAIDA多一個羧甲基。結構上的不同,使得NTAIDA更穩定,能得到更高純度的目標蛋白。IDA更小,使得它與基質更緊密的結合,提高了載量,但同時也導致了更多的非目標蛋白的結合,但IDA相對便宜。

 

His標簽蛋白純化常用到的金屬離子有Ni2+、Cu2+、Co2+、Zn2+。與His的親和度:Cu2+Ni2+Zn2+Co2+;得到的目標蛋白純度:Cu2+Ni2+Zn2+Co2+。

 

一些還原劑會影響IDA、NTA的性能。比如DTT會使金屬離子從IMAC 樹脂上剝落,常?;崾故髦難丈湮厴?;EDTA對配基的影響更大。但實驗顯示,NTA耐受各類化學試劑的能力明顯優于IDA。

 

總結起來,選用IMAC純化蛋白前,得先問這幾個問題:

 

1.蛋白純度、蛋白載量,哪個是你的目標?

2.你的樣本中是否包含一些還原試劑如DTTEDTA?

3.你的預算是?

 

如果你只是想得到高的蛋白產量,對純度的要求稍微低點,IDA結合的樹脂可能是你正確的選擇。如果想最大限度的減少非特異性結合,可以使用Zn2+ Co2+結合樹脂。從各類數據來看,NTA結合樹脂都表現出極大的優越性。而Ni-NTA樹脂則相當于His標簽蛋白純化的行業標準!

 

不同的樣本或許純化的條件不盡相同,但以上最基本的原則不同樣本都是適用的。

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