新浪微博
微信互動

dnf吧十周年武器装扮:定量蛋白組學的詳細介紹

手机怎么强制dnf下线 www.dooan.icu

SILAC
背景簡介:

    SILAC( Stable Isotope  Labeling with   Amino acids in  Cell culture)技術是依據細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩定同位素標記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質組進行代謝標記的方法;13C,15N,2H是穩定同位素,沒有放射性,因此可以在常規條件下進行試驗。


    Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC最常用的氨基酸。將(13C,15N,2H)等穩定同位素標記的R、K、L加入細胞培養基中,在細胞進行蛋白質合成時,這些穩定同位素標記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質中。通過>6代的細胞增殖,整個細胞的蛋白質組會被穩定同位素氨基酸”標記”;SILAC“標記”了蛋白質與“未標記”的蛋白質(普通培養基培養)存在一定數目的質量差異,該質量差異在后續LC-MS的一級質譜( MSl)中呈現一對同位素質譜峰,通過質譜峰的信號強度能精確實現對2組樣品中每一個蛋白質表達水平的相對定量,最終能確定蛋白質表達水平差異(差異蛋白質組學分析)和區分特異性和非特異性相互作用(蛋白質相互作用分析);同時通過二級質譜( MS/MS,MS2)實現對樣品中蛋白質的鑒定。


     SILAC技術結合LC-MS能同時實現對2組樣品中蛋白質的定性和定量分析。實驗技術“高、大、上“,定量精確,通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質表達水平差異,便于快速找到感興趣的目標分子。同時,利用SILAC技術,能明顯提高文章的檔次。


上一篇:蛋白多肽
下一篇:蛋白質質譜鑒定服務
分享到: