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dnf狂战士:細胞轉染活動促銷中

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中洪博元生物    細胞轉染促銷進行中. . .


一.產品簡介:


      慢病毒(Lentivirus)載體是以HIV-1為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍,慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA,實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默,為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能,以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者,不但具備特異性地使基因表達沉默的能力,而且充分發揮了慢病毒載體自身所具備的優勢,為基因功能的研究提供了更強有力的工具。


二.簡要步驟:


1、慢病毒轉染貼壁細胞實驗方法 
  (1)慢病毒轉染前18-24h,將貼壁細胞以1×105個/ml鋪到6孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×105個/ml左右。 
  (2)次日,用含有6 μg/ml polybrene的1ml新鮮培養基替換原培養基,加入適量病毒懸液。37℃孵育。
  (3)(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)8h-16h后,觀察轉染情況,更換新鮮培養基1ml/孔,37℃培養。
  (4)如果慢病毒含有熒光蛋白,一般轉染48小時后可見明顯熒光表達,72小時后更加明顯。如需FACS檢測轉染效率,可在轉染后72-96小時進行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選,可以在轉染3-4天后開始加藥。


2、慢病毒轉染懸浮細胞實驗方法  
  (1)在2×105個/ml懸浮細胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒,充分混勻。37℃孵育。 如果該細胞株不易受慢病毒感染,可以使用離心孵化的方法。即在細胞培養板上加入病毒感染液后在離心機上以2500rpm(1000-1500g)在32℃或者室溫下離心90min。
  (2)(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)8h-16h后,觀察轉染情況,更換新鮮培養基1ml/孔(6孔板),37℃培養。 
  (3)繼續培養1-3天。中間視細胞生長情況可傳代或換液。



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